扩展&结构光 照明显微镜: 提高分辨率的完美组合

如今,Thy1-GFP转基因小鼠被广泛用于需要对神经组织进行荧光标记的神经生物学研究中(有关Thy1-GFP小鼠品系的更多详细信息,请参见Feng等人发表资料,2000年Neuron科学期刊)。特别是由于细胞表面的GFP荧光,成熟的神经元很容易被检测到并且适合于超分辨率成像。

这里我们显示了通过扩展显微镜协议(用于组织的ProExM协议,请访问网站以获取详细信息)处理的整个Thy1-GFP小鼠大脑切片。在扩展协议之前(100 um振动切片)和之后测量凝胶尺寸,可以发现初始样品尺寸增加了4.5倍。 之后使用X-Light V3共聚焦旋转盘使用4倍物镜采集样品(厚度约450 µm)以获取整个展开部分的大视场(图A)。

使用全自动系统工作能整体观察大脑,确定要通过超分辨率分析的特定区域。在这种特殊情况下就可对包含神经棘的区域进行更详细的分析(图B-D)。用60倍物镜(1.40 NA)的CrestOptics结构照明显微镜(SIM)系统获取这些超高分辨率图像。扩展协议后,树突棘大小明显增加(图C),这不仅可以更好地解析单个树突棘,而且可以更好地解析突触功能(例如Bassoon和Homer蛋白)。

总之,与单独使用每种方法相比,样本扩展法与SIM显微镜的组合可将分辨率提高到较小的纳米尺度

图A:
共聚焦显微镜的大视野

图B:
通过结构照明显微镜观察感兴趣的部分

单平面显示

最大强度投影(Z方向为12.3 um)

图C:
树突扩展前后

普通样本

扩展样本

图D:
三维视频和深度视图

该应用说明由Emerald Perlas(EMBL-罗马欧洲分子生物学实验室组织学部负责人)和Alvaro Crevenna(EMBL-罗马欧洲分子生物学实验室显微镜服务部负责人)合作编写。

EMBL-罗马欧洲分子生物学实验室

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